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UV1901PC紫外分光光度計法測定毛丁白頭翁中總苷類的含量

測定毛丁白頭翁植物的根及根莖中總苷類的含量。

毛丁白頭翁植物的根及根莖中總苷類簡介

臨床上主要用于感冒發熱、咳嗽痰多、痢疾、小兒疳積,外用治跌打損傷、毒蛇咬傷…等。毛丁白頭翁的主要化學成分為總苷類,近年來對毛丁白頭翁提取物中總苷類的含量的測定報道甚少,此實驗選用常用的回流提取法提取毛丁白頭翁藥材,選用熊果苷為對照品(熊果苷是毛丁白頭翁提取物中總苷類中的一個主要成分且在醫藥方面熊果苷有著極其重要和廣泛的應用)用紫外分光光度法對毛丁白頭翁提取物中的總苷類含量進測定，方法準確,快速,重現性好,可作為毛丁白頭翁藥材中內在質量評價的重要依據。

實驗方法:采用UV1901PC紫外分光光度計,檢測波長為286nm,線性范圍為16.0～37.0ug/ml,相關系數為0.9999,平均回收率為100.6%,RSD為2.313%(n=6)。

1 儀器與材料

儀器:UV1901型紫外可見分光光度計(上海奧析)。

電子天平。旋轉蒸發儀。

材料:毛丁白頭翁95%乙醇,乙酸乙酯,均為分析純。

2 方法與結果

2.1 測定波長的選擇

精密稱取熊果苷對照品2.0mg,置10ml容量瓶中,用95%乙醇配制成O.2mg/ml的溶液,搖勻,以95%乙醇為空白,將待測液盛于比色皿中,置于比色池中,在200～800nm波長段掃描。結果表明毛丁白頭翁提取物中總苷類在223nm和286nm處有zui大吸收峰,但由于在286nm波長處的峰形較223nm波長處的峰形完好且286nm處受到雜質的干擾小,故選286nm作為毛丁白頭翁提取物中總苷類的測定波長。

2.2 標準曲線的繪制

精密稱取熊果苷對照品5.3mg,置10ml容量瓶中,用95%乙醇溶解并定容成0.53mg/ml,作為貯備液。精密吸取貯備液5ml,置50ml的容量瓶中,用95%乙醇溶解并定容成0.053mg/ml的標準溶液,精密吸取標準品溶液3,4,5,6,7ml,分別置于10ml容量瓶中,用95%乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,使濃度分別為16.0,21.0,27.0,32.0,37.Oug/ml,用95%乙醇作空白,將待測液盛于比色皿中,置于比色池中,于波長286nm處測定吸收度,結果見下圖。

所測結果經回歸得回歸方程:y=9.24827x-0.01474(r=0.9999)。結果表明:熊果苷對照品溶液

在16.0～37.0ug/ml濃度范圍內,濃度與吸收度線性關系良好。

2.3 精密度試驗

精密吸取濃度為0.053mg/ml的熊果苷對照品溶液4ml置于10ml容量瓶中,加95%乙醇稀釋至刻度,搖勻,用95%乙醇作

空白,將待測液盛于比色皿中,置于比色池中,于波長286nm處測定吸收度,結果見表1。

表1 

UV1901PC紫外分光光度計精密度實驗結果結果表明:儀器精密度良好。

2.4 穩定性試驗

2.4.1 樣品溶液的制備

精密稱取毛丁白頭翁粉末1.25g,加入40m195%乙醇,熱回流提取三次,每次1h.將得到的總提物合并后抽濾,然后減壓回收95%乙醇,將得到濃縮物用蒸餾水溶解,然后用乙酸乙酯萃取水液五次,棄去乙酸乙酯萃取液,將得到的水液移到蒸發皿中,在70℃水浴鍋上蒸干水分,殘渣用95%乙醇溶解并轉入25ml容量瓶中,加95%乙醇稀釋至刻度,搖勻,作為測定總苷類的供試品溶液。2.4.2 樣品溶液和對照品溶液穩定性的測試精密吸取濃度為0.053mg/ml的熊果苷對照品溶液10ml,毛丁白頭翁樣品液0.5ml分別置于25ml容量瓶中,加95%乙醇稀釋至刻度,搖勻,用95%乙醇作空白,將待測液盛于比色皿中,置于比色池中,于波長286nm處測定吸收度,時間間隔為30min.

UV1901PC紫外分光光度計法穩定性實驗結果

  結果表明:對照品溶液和樣品溶液的穩定性在4小時內良好。

2.5 重現性試驗

精密稱取毛丁白頭翁根和根莖的粉末6份,照樣品項下制得樣品液。從樣品液中精密吸取0.5ml置于25ml容量瓶中,加95%乙醇稀釋至刻度,搖勻,用95%乙醇作空白,將待測液盛于比色皿中,置于比色池中,于波長286nm處測定吸收度,按標準曲線項下的回歸方程計算含量,結果見表3。

表3 

UV1901PC紫外分光光度計法重現性實驗結果

原藥材中總苷類百分含量(%)RSD(%)

2.1702.0522.1292.0512.0852.075

2.246

  結果表明:重現性較好。

2.6 加樣回收率試驗

精密稱取毛丁白頭翁根和根莖粉末6份,照樣品項下制得樣品液。精密吸取0.5ml置于25mi

容量瓶中,精密加入熊果苷對照品液,加95%乙醇稀釋至刻度,搖勻,于波長286nm處測定吸收度,并計算回收率.

 紫外分光光度法熊果苷回收率實驗結果

樣品含熊果苷(mg)加入熊果苷(mg)實測量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)

2.7 樣品測定

精密吸取毛丁白頭翁樣品溶液0.5ml置于25ml容量瓶中,加95%乙醇稀釋至刻度,搖勻,用95%乙醇作空白,將待測液盛于比色皿中,置于比色池中,于波長286nm處測定吸收度,按標準曲線項下的回歸方程計算含量,結果見表5。表5 毛丁白頭翁總苷類的含量測定結果(紫外可見分光光度法)

UV1901PC紫外分光光度計測定毛丁白頭翁提取物中總苷類的含量在16.0～37.0ug/ml濃度范圍內線性關系良好(r=0.9999)。毛丁白頭翁樣品液中總苷類的回收率為100.6%。該方法簡便、準確、重現性好。

UV1901PC紫外分光光度計具有簡便易行的特點,用此法測定毛丁白頭翁植物中總苷類的含量并以此含量作為此藥材的質量控制的一個方面有一定的實際意義。